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彩乐园官网CLY05.vip 基因敲除THP

发布日期:2024-11-19 05:29点击次数:

THP-1细胞是从又名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血等分离得到的东说念主单核细胞白血病细胞彩乐园官网CLY05.vip,具有悬浮滋长并变成松散团块的本性,倍增时候约为60-70小时。该细胞系被正常用于单核细胞和巨噬细胞相关的机制、信号通路以及养分和药物运载等商讨,是商讨免疫和炎症的梦想用具,好像被带领分化为巨噬细胞M1和M2,并开释相应的细胞因子。

基因敲除THP-1细胞的应用 疾病机制与信号通路商讨:基因敲除THP-1细胞可用于探究疾病发生和发展的分子机制,特地是与免疫和炎症相关的疾病。通过敲除特定的基因,不错不雅察其对细胞功能、信号通路和细胞因子开释的影响,从而揭示疾病背后的生物学过程。举例,商讨东说念主员不错欺骗基因敲除THP-1细胞商讨巨噬细胞在动脉粥样硬化中的作用,以及泡沫细胞的变成机制。 药物筛选与疗效评估:基因敲除THP-1细胞亦然药物筛选和疗效评估的遑急用具。通过构建特定基因的敲除模子,不错模拟患者的疾病现象,进而测试药物对疾病现象细胞的影响。这种款式不仅涵养了药物筛选的遵守,还不错镌汰药物研发的老本和风险。举例,在商讨病毒性肺炎的谐和过程中,商讨东说念主员欺骗基因敲除THP-1细胞评估了CypA和CD147在病毒带领的炎症反映中的作用,为斥地新的抗炎症药物提供了念念路。 细胞谐和与再生医学:在细胞谐和和再生医学界限,基因敲除THP-1细胞也展现出庞大的后劲。通过敲除或修饰特定基因,不错优化THP-1细胞分化为特定功能细胞的才调,为细胞谐和提供更优质的细胞起原。此外,基因敲除THP-1细胞还不错用于构建疾病模子,为细胞替代疗法和基因谐和提供可靠的推行平台。 伸开剩余70%

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CRISPR/Cas9基因敲除THP-1细胞商讨案例

案例一、基于CRISPR/Cas9技能构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株的商讨

该商讨旨在取舍CRISPR/Cas9技能构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)基因敲除的THP-1细胞株,为商讨IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模子。

商讨者谋划了靶向IDO1基因的3条向导RNA(gRNA),构建了IDO1-gRNA重组质粒,并通过酶切及测序决然后包装成Lenti-IDO1-gRNA慢病毒。欺骗Cas9慢病毒感染THP-1细胞取得相识抒发Cas9卵白的细胞株,再经Lenti-IDO1-gRNA慢病毒感染敲除IDO1基因,有限稀释法取得单克隆细胞株。通过T7E1酶切检测gRNA打靶遵守,PCR居品测序和Western blot决然IDO1基因敲除后果。收效构建了3种IDO1-gRNA重组质粒,并取得了3株THP-1 IDO1-KO单克隆细胞株。商讨发现,IDO1基因敲除可阻拦THP-1细胞增殖,下调THP-1巨噬细胞CD11b、CD68抒发,上调CD14抒发彩乐园官网CLY05.vip,并增强THP-1巨噬细胞吞吃功能。

该商讨收效构建了IDO1基因敲除的THP-1细胞株,并揭示了IDO1对THP-1细胞增殖活性、分化改变以及巨噬细胞吞吃功能改变的遑急作用,为后续进一步计议IDO1基因在巨噬细胞中的功能及机制商讨奠定了基础。

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案例二、GLP-1R基因敲除的THP-1细胞系建立过火功能商讨

巨噬细胞具有高度异质性和可塑性,在不同系统中不同的疾病或褪色疾病的不同阶段,巨噬细胞不错发生表型变化,从而实施不同的功能。胰高血糖素样肽-1(GLP-1)在调控巨噬细胞搬动及表型分化等方面发达着一定作用。

该商讨旨在通过Cas9慢病毒介导的款式构建GLP-1R基因相识敲除的THP-1细胞系,探究GLP-1R抒发对巨噬细胞搬动和极化的影响。商讨者构建了针对GLP-1R基因的特异性打靶慢病毒载体,建立了GLP-1R-/-THP-1细胞系,并使用嘌呤霉素进行筛选。通过基因测序和卵白行踪推行(Western blot)进行决然后,差异用佛波酯(PMA)、打扰素γ(INF-γ)+脂多糖(LPS)、白介素4(IL-4)刺激野生型组(WT组)和GLP-1R-/-组(KO组),进一步构建WT组和KO组的M0、M1、M2型巨噬细胞模子。欺骗流式细胞术检测细胞名义分子的抒发,qRT-PCR检测相关mRNA的抒发,以及Transwell和划痕推行检测GLP-1R对巨噬细胞的搬动情况。基因测序及Western blot截止阐明GLP-1R-/-THP-1细胞系构建收效。流式细胞术截止裸露,M0型巨噬细胞高抒发CD14+,M1型高抒发CD14+CD80+,M2型高抒发CD14+CD206+。qRT-PCR截止裸露,与WT组比拟,KO组带领得到的巨噬细胞中M1型巨噬细胞标记物mRNA抒发昭着升高,M2型巨噬细胞标记物mRNA抒发显耀镌汰。此外,GLP-1R好像影响巨噬细胞的搬动。

该商讨收效构建了一株GLP-1R基因敲除的THP-1细胞系,并通过对不同细胞系的带领分化商讨得出GLP-1R基因缺少可带领巨噬细胞分泌促炎因子,向M1型巨噬细胞极化;而GLP-1R则可促使巨噬细胞分泌抗炎因子,向M2型巨噬细胞极化。这一发现为真切了解GLP-1在巨噬细胞功能改变中的作用提供了新的视角。

总而言之,基因敲除THP-1在文件中的代表性商讨进展体刻下多个方面,包括构建特定基因的敲除模子、揭示基因在巨噬细胞中的作用机制以及为疾病谐和和药物筛选提供新的念念路和款式等。

微谨生物敲除细胞构建经过

微谨生物专注于提供全面的基因裁剪工作,咱们欺骗先进的基因裁剪技能,包括但不限于CRISPR/Cas9系统,为客户提供精确的基因裁剪措置决策。工作范围正常,涵盖细菌、真菌等微生物的基因裁剪,以及细胞层面的基因裁剪,具体包括基因敲除、敲入、点突变等多种应用。

此外,微谨生物还有效刚硬的KO细胞现货库(包括自建细胞平台及分享平台)和微生物菌种库,遮蔽热点商讨界限彩乐园官网CLY05.vip,振作您的各类科研需求。

发布于:广东省